2. مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی و مولکولی، پژوهشکده سلامت، دانشگاه علوم پزشکی بابل، بابل، ایران ، elaheh.ferdosi@yahoo.com
چکیده: (7 مشاهده)
سابقهو هدف: سیستم بیان پروتئین بدون سلول روشی نوین برای سنتز پروتئین‌های نوترکیبی مانند اینترلوکین 2 است که در پاسخ‌‌های سیستم ایمنی در بیماران سرطانی و خودایمنی اهمیت بالایی دارد. هدف از این مطالعه، سنتز اینترلوکین 2 با تکنیک بیان بدون سلول با بازده بالا و هزینه کمتر می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی،جهت تکثیر cDNA اینترلوکین 2 در وکتور بیانی pcDNA3.1 از میزبان باکتریایی DH5α استفاده شد. پس از کشت رده سلولی یوکاریوتی CHO و تهیه لیزات سلولی، سیتوپلاسم سلولی که حاوی فاکتورهای بیان پروتئین هستند به همراه افزودن مواد ضروری مورد نیاز برای بیان آمینواسیدها در مجاورت وکتور بیانی حاوی قطعه ژنی اینترلوکین 2 قرار گرفت. نمونه کنترل منفی نیز شامل تمامی مواد نمونه مورد آزمایش بدون حضور وکتور بیانی حاوی قطعه ژنی می‌باشد. هر دو نمونه به مدت 20 ساعت و در دمای 25 درجه سانتی‌گراد انکوبه شدند. بررسی صحت بیان IL-2 نوترکیب انسانی با استفاده از تکنیک‌های SDS-PAGEو Dot Blot با مونوکلونال آنتی بادی علیه اینترلوکین 2 انجام شد. یافته‌ها: در بررسی صحت پروتئین بیان شده با تکنیک SDS-PAGE، باند مربوط به پروتئین IL-2 تولید شده در نمونه مورد آزمایش با اندازه 15 کیلودالتون مشاهده شد در حالی که در نمونه لیزات سلولی بدون وکتور باند مشاهده نشد. در تکنیک دات بلات با استفاده از نانوذرات طلا، از اتصال IL-2به عنوان آنتی ژن به مونوکلونال آنتی بادی اختصاصی علیه IL-2، لکه مورد نظر به دست آمد. همچنین آنالیز کمی میزان بیان با نانودراپ، µg/ml 17/8 گزارش شد. نتیجه‌گیری: نتایج حاصل از تکنیک‌ها نشان داد که توانایی سنتز و تولید IL-2به روش بیان بدون سلول وجود دارد.
