|
استخراج و تخلیص فریتین از بافت کبد
|
رضا بهجتی اردکانی، *   ، محمدرضا صادقی، ، رویا قدس، ، علی احمد بیات، ، محمد جدی تهرانی |
|
|
|
چکیده: (10924 مشاهده) |
| سابقه و هدف: مولکول فریتین با وزن مولکولی 450 کیلودالتون، پروتئین اصلی ذخیره کننده آهن می باشد که از 24 زیرواحد شامل زنجیره های سبک و سنگین تشکیل شده است و هر مولکول آن می تواند 4500 اتم آهن فریک را در خود ذخیره نماید. هدف این مطالعه، تعیین تخلیص فریتین با درجه خلوص بالا جهت استفاده در سیستم های تشخیصی و تحقیقاتی می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه با استفاده از حرارت دادن بافت هموژنیزه شده کبد در دمای 75 درجه سانتیگراد، رسوب دادن با سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با سفادکس G-200، فریتین از این بافت استخراج و تخلیص گردید. بمنظور افزایش درجه خلوص فریتین کروماتوگرافی چرخشی مورد استفاده قرار گرفت. پروتئین حاصل، در ژل پلی آکریلامید در مجاورت سدیم دودسیل سولفات الکتروفورز گردید (SDS-PAGE). از آزمون الایزا و رنگ آمیزی ژل با پتاسیم فری سیانید برای اطمینان از حصول فریتین و از رنگ آمیزی ژل با نیترات نقره جهت اطمینان از درجه خلوص فریتین استفاده شد. جهت تایید وجود زیرواحدهای 19 و 21 کیلودالتون، فریتین حاصله در شرایط احیا در حضور 2-مرکاپتو اتانول الکتروفورز شد. یافته ها: در این روش فریتین کاملا خالص بدست آمد و بازده این روش 100 میکروگرم فریتین به ازای هر گرم بافت تازه کبد بود. الکتروفورز فریتین در شرایط احیا در حضور 2-مرکاپتو اتانول، وجود زیرواحدهای 19 و 21 کیلودالتون را در این پروتئین تایید نمود. نتیجه گیری: روش مورد استفاده جهت استخراج و تخلیص فریتین از بافت کبد منجر به تولید فریتین با درجه خلوص بسیار بالا گردید که برای استفاده در زمینه های تشخیصی و تحقیقاتی مناسب بوده و بازده این روش نسبت به مطالعات دیگر قابل قبول می باشد. |
|
| واژه‌های کلیدی: فریتین، تخلیص، کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون، کروماتوگرافی چرخشی |
|
|
متن کامل [PDF 516 kb]
(5382 دریافت)
|
نوع مطالعه: تحلیلی |
موضوع مقاله:
بیوشیمی
پذیرش: 1393/3/10 | انتشار: 1393/3/10
|
|
|
|
|
|
