2. مرکز تحقیقات فناوری‌های نوین زیست پزشکی و میکروبی، پژوهشکده سلامت، دانشگاه علوم پزشکی بابل، بابل، ایران ، elaheh.ferdosi@yahoo.com
چکیده: (2789 مشاهده)
سابقهو هدف: بیماری هموفیلی نوع A، شایع‌ترین نوع این بیماری است. جهت درمان بیماران هموفیلی، کنسانتره تزریقی فاکتور VIII انسانی، به دو صورت مشتق از پلاسما و نوترکیب در بازار وجود دارد. با توجه به خطر ابتلا به بیماری‌های عفونی در اثر تزریق خون یا محصولات خونی اهدایی از جمله فاکتور VIII مشتق از پلاسما، می‌توان از فاکتور VIII نوترکیب که از لحاظ ایمنی بی‌خطر، دارای خلوص بالاتر از نمونه مشتق از خون بوده و نیز نیمه عمر طولانی‌تری در خون بیماران مصرف کننده دارد، استفاده نمود. هدف از این مطالعه، بیان و سنتز فاکتور VIII نوترکیب انسانی با استفاده از سیستم بیانی یوکاریوتی عاری از سلول به عنوان استراتژی نوین سنتز داروهای نوترکیب می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی وکتور pcDNA3 حاوی قطعه ژنی بدون دمین B فاکتور VIII انعقاد خون، به داخل باکتری DH5α مستعد شده، ترانسفورم گردید. پس از تکثیر باکتری و افزایش وکتور مورد نظر، در این مرحله وکتور تکثیر یافته استخراج شد و کیفیت و غلظت آن تعیین گردید. سپس سلول‌های یوکاریوتی CHO-K1 کشت داده شدند و از تراکم بیش از ده میلیون سلول آن‌ها، عصاره سلولی تهیه شد. وکتور استخراج شده با عصاره سلولی و محلول بیانی ترکیب و فرآیند بیان در دمای °C30 و °C37 انجام شد. میزان بیان با تکنیک‌های الایزا و دات بلات بررسی گردید. یافته‌ها: در این پژوهش با تکنیک الایزا میزان بیان فاکتور VIII انعقاد خون نوترکیب انسانی در نمونه پایه با دمای °C30، نمونه 2 با دمای °C30، نمونه پایه با دمای °C37 و نمونه 4 کنترل منفی با دمای °C30 در مدت 20 ساعت به ترتیب 275، 276، 273 و صفر نانوگرم در میلی‌لیتر گزارش شد. در تکنیک دات بلات نیز نتایج کمی ذکر شده به صورت کیفی با شدت رنگ لکه‌ها تائید گردید. نتیجه‌گیری: نتایج حاصل نشان داد که از روش بیان عاری از سلول می‌توان برای سنتز فاکتور VIII نوترکیب استفاده نمود. شرایط بکار گرفته شده در این پژوهش جهت بیان بدون سلول فاکتور VIII نوترکیب، نسبت حجمی 50/50 از عصاره سلولی CHO-K1 مناسب بوده است و محلول بیانی پایه در دمای °C30 بیشترین غلظت محصول را بیان نمود. به دلیل استفاده از عصاره سلولی یوکاریوتی CHO-K1، فاکتور VIII نوترکیب انسانی سنتز شده دارای تغییرات پس از ترجمه است که جهت عملکردی بودن این پروتئین در بدن انسان بسیار مهم می‌باشد.
Ebrahimi M, Ferdosi-Shahandashti E, Zarei M, Kardar G. Expression and Synthesis of Recombinant Human Coagulation Factor VIII Using a Cell-Free Expression System. J Babol Univ Med Sci 2024; 26 URL: http://jbums.org/article-1-11698-fa.html
ابراهیمی محمدرضا، فردوسی شاهاندشتی الهه، زارعی محبوبه، کاردر غلامعلی. بیان و سنتز فاکتور VIII انعقادی نوترکیب انسانی با استفاده از سیستم بیانی بدون سلول. مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی بابل. 1403; 26 ()
