Journal of Babol University of Medical Sciences
مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی بابل
J Babol Univ Med Sci
Medical Sciences
http://jbums.org
1
admin
1561-4107
2251-7170
10.22088/jbums
fa
jalali
1396
3
1
gregorian
2017
6
1
19
6
online
1
fulltext
fa
مطالعه بیان ژن ureI هلیکوباکترپیلوری به روش RT-PCR
Study of the Expression of Helicobacter Pylori Urei Gene by RT-PCR
ژنتیک، بیولوژی سلولی و مولکولی
Genetics, Cell and Molecular Biology
تحقیقی
Research
<p dir="RTL" style="text-align:justify;text-justify:inter-ideograph;line-height:16.0pt;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">سابقه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">هلیکوباکترپیلوری یک ارگانیسم مارپیچی شکل و گرم منفی بوده که عامل زخم معده است و نقش مهمی در ایجاد سرطان معده دارد. اجزای مختلف اوره آز، از عوامل مهم برای تحریک سیستم ایمنی هستند. هنوز واکسن موثری علیه این باکتری وجود ندارد و تحقیقات در زمینه یافتن واکسن، ضروری به نظر می رسد. هدف از تحقیق حاضر، ایجاد سازواره ژنی بر اساس ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ureI</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> و بررسی بیان آن است.</span></span></p>
<p dir="RTL" style="line-height:16.0pt;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش­ها:</span></span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">در این مطالعه تجربی، تکثیر ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ureI</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> با انجام </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> روی ژنوم سویه استاندارد هلیکوباکترپیلوری تهیه شده از موسسه پاستور، صورت پذیرفت. قطعه 612 جفت بازی مربوط به </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ureI</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> به روش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">T/A cloning</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> در پلاسمید </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">pTZ</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> کلون گردید، سپس ساب کلونینگ این ژن در پلاسمید </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PIRES2-EGFP</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> انجام شد. سازواره </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PIRES2-EGFP-<em>ureI</em></span></span><span style="font-size:10.0pt;"> به روش الکتروپوریشن به سلول های جانوری </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CHO</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> منتقل و بیان یوکاریوتی ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ureI</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> با تکنیک </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RT-PCR</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> بررسی گردید.</span></span></p>
<p dir="RTL" style="line-height:16.0pt;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته­ ها:</span></span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">کلونینگ قطعه 612 جفت بازی ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ureI</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> در دو ناقل </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">pTZ</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PIRES2-EGFP</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> با استفاده از تکنیک های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span><span style="font-size:10.0pt;">، هضم آنزیمی توسط </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">SacI</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> و </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EcoRI</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> و تعیین توالی تایید گردید. پس از انجام </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RT-PCR</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> روی سلول های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CHO</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> ترانسفرم شده، باند مربوط به ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ureI</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> تشکیل شد.</span></span></p>
<p dir="RTL" style="text-align:justify;text-justify:inter-ideograph;line-height:16.0pt;text-autospace:none;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه­ گیری:</span></span></strong><span style="font-size:10.0pt;"> وکتور نوترکیب </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PIRES2-EGFP-<em>ureI</em></span></span><span style="font-size:10.0pt;">، قدرت بیان ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ureI</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> را دارد. بیان موفق این ژن در سلول های جانوری، می تواند در جهت بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی به عنوان یک واکسن نوترکیب مد نظر قرار گیرد. </span></span></p>
<p></p>
<div style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><span style="color:#0000FF;"><strong>BACKGROUND</strong> <strong>AND</strong> <strong>OBJECTIVE:</strong> </span>Helicobacter pylori is a spiral shaped and gram negative bacterium which causes peptic ulcer and has an important role in gastric carcinoma. Different components of urease are the important factor to stimulate the immune system. There is no effective vaccine against this bacteria and research on finding an effective vaccine is necessary. The aim of present study was to produce ureI gene construct and evaluation of the expression of this gene.<br>
<span style="color:#0000FF;"><strong>METHODS:</strong></span> In this experimental study, the amplification of ureI gene was performed using PCR on standard strains of H. pylori genome that obtained from Pasteur institute. 612 bp fragment of ureI gene was cloned by T/A cloning technique into pTZ plasmid, and sub-cloning was done in PIRES2-EGFP vector. PIRES2-EGFP-ureI recombinant vector was transformed using electroporation into CHO cells and ureI gene expression was evaluated by RT-PCR.<br>
<span style="color:#0000FF;"><strong>FINDINGS:</strong> </span>Cloning of 612 bp fragment for ureI gene in pTZ and PIRES2-EGFP vectors had confirmed using PCR, digestion by SacI/EcoRI restriction enzymes and sequencing. After the RT-PCR on transformed CHO cells, the ureI gene fragment was observed.<br>
<span style="color:#0000FF;"><strong>CONCLUSION:</strong></span> The PIRES2-EGFP-ureI recombinant vector can express the ureI gene. The successful gene expression of this target gene in animal cells can be used to evaluate the immunogenicity as a vaccine in laboratory animals. Also, this generated recombinant vector has the potential for assay as DNA vaccine in future experiments</span></div>
هلیکوباکترپیلوری, کلون سازی, ureI, الکتروپوریشن, بیان ژن
Helicobacter pylori, cloning, ureI, Electroporation, Gene Expression
35
41
http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-2868-1&slc_lang=fa&sid=1
M
Fazeli
مهسا
فاضلی
newsgenetic@yahoo.com
100319475328460026301
100319475328460026301
No
Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, I.R.Iran.
زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی
A
Doosti
عباس
دوستی
abbasdoosti@yahoo.com
100319475328460026302
100319475328460026302
Yes
Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, I.R.Iran
مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی