Journal of Babol University of Medical Sciences
مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی بابل
J Babol Univ Med Sci
Medical Sciences
http://jbums.org
1
admin
1561-4107
2251-7170
10.22088/jbums
fa
jalali
1391
8
1
gregorian
2012
11
1
14
6
online
1
fulltext
fa
اثر یون فسفات بر خواص بیو فیزیکی کانال پتاسیمی شبکه آندوپلاسمی هپاتوسیت موش صحرائی
Effect of Phosphate Ions on Biophysical Properties of Rat Hepatocytes Endoplasmic Reticulum Potassium Channel
بیوشیمی
Biochemical
تحلیلی
Research
سابقه و هدف: شبکه آندوپلاسمی ارگانل مهمی است که در تنظیم طیفی از اعمال نقش دارد. اخیرا کانال پتاسیمی در غشاء شبکه آندوپلاسمی گزارش گردید که نقش فیزیولوژیک آن نامشخص است. شبکه آندوپلاسمی هپاتوسیت منبع غنی از آنزیم گلوکز 6- فسفاتاز است که در کنترل گلوکونئوژنز دخالت دارد. از آنجاییکه یون فسفات متابولیت داخل لومنی این آنزیم شبکه آندوپلاسمی است در این مطالعه اثر یون فسفات بر فعالیت کانال پتاسیمی مورد بررسی قرار گرفت.<br>مواد و روشها: استخراج وزیکول های شبکه آندوپلاسمی از طریق خارج نمودن کبد موش صحرایی و هموژنیزاسیون و انجام مراحل مختلف اولتراسانتریفیوژ صورت گرفت. فسفاتیدیل کولین از زرده تخم مرغ تازه استخراج گردید. غشاء دولایه لیپیدی با استفاده از فسفاتیدیل کولین و بر روی منفذی به قـطر 350µm واقع در حد فاصل دو محفظه cis و trans که بترتیب حاوی کلرور پتاسیم 200 و 50 میلی مولار بـودند تشکیل، سپس وزیکولها بداخل غشاء الحاق شد. فعالیت کانال با روش ثبت تک کانال در شرایط کنترل و در حضور یون فسفات در سمت داخل لومنی کانال ثبت شد و سپس خواص بیو فیزیکی آن با نرم افزار clampfit10 آنالیز گردید.<br>یافته ها: کانال پتاسیمی شبکه آندوپلاسمی دارای کنداکتانس 550Ps بود و فعالیت آن در بازه ولتاژی 30+ تا 40- میلی ولت بصورت وابسته به ولتاژ تغییر کرد به این صورت که احتمال باز بودن و متوسط دامنه جریان عبوری از کانال در ولتاژ 30+ میلی ولت بترتیب 73/0 و 26 پیکوآمپر ولی در ولتاژهای پایین، کانال از حداقل فعالیت برخوردار بود. در حضور غلظت 50 میلی مولار یون فسفات، میانگین جریان عبوری و نیز احتمال باز بودن کانال در ولتاژهای مختلف نسبت به شرایط کنترل تغییر معنی داری پیدا نکرد. <br>نتیجه گیری: نتایج مطالعه نشان داد که غشا شبکه آندوپلاسمی هپاتوسیت در موش صحرایی دارای نوعی کانال پتاسیمی با فعالیت وابسته به ولتاژ بوده و بنظر می رسد که ویژگی های الکتروفیزیولوژیک آن تحت تاثیر آنیون فسفات سمت د اخل لومنی قرار نمی گیرد.
BACKGROUND AND OBJECTIVE: Rough endoplasmic reticulum is important organelle that plays a role in the regulation of a range of functions. Potassium channels in the endoplasmic reticulum membrane were recently reported that its physiological role is unknown. Hepatocyte endoplasmic reticulum is a rich source of glucose 6- phosphatase that is involved in the control of gluconeogenesis. Since phosphate ions are intra-luminal metabolites for this enzyme of endoplasmic reticulum thus, in this study, the effect of phosphate ions on potassium channel activity was studied.<br>METHODS: Endoplasmic reticulum vesicles extraction was accomplished following liver excision in rats, homogenization and several stages of ultracentrifugation. Phosphatidylcholine was extracted from fresh egg yolk. Bilayer lipid membrane was formed in a 350 µm diameter aperture in between two chambers cis and trans contained 200/50 mMKCl solutions respectively, then vesicles were incorporated into bilayer lipid membrane. Ion channel activity was recorded by single channel recording technique both in control conditions and presence of phosphate ion in luminal face, next biophysical ion channel properties analyzed by Clampfit10 software.<br>FINDINGS: Endoplasmic reticulum Potassium channel was 550 pS conductance and its activity changed as voltage dependent manner in voltage range of +30 to -40 mV, in this respect the open probability and the average unitary current in a voltage + 30 mV were 0.73 and 26 pA, respectively. However, at lower voltages, the channel activity was minimal. In the presence of 50 mM phosphate ion, mean unitary current and also channel open probability did not change significantly in different voltages compared to the control condition (p>0.05).<br>CONCLUSION: Rat hepatocyte endoplasmic reticulum membranes has been a kind of potassium channel with voltage-dependent activity and it seems that its electrophysiological characteristics did not influenced by phosphate anion in luminal face.
شبکه آندوپلاسمی, کانال پتاسیم, یون فسفات
Endoplasmic Reticulum, Potassium channel, Phosphate ion
33
38
http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-1370-822&slc_lang=fa&sid=1
H
Sepehri,
حمید
سپهری،
10031947532846004535
10031947532846004535
Yes
M
Ashrafpour
منوچهر
اشرف پور
10031947532846004536
10031947532846004536
No