fa تمایز عصبی سلولهای بنیادی ژله‌وارتون در محیط کشت سه بعدی پایه کیتوزان بافت شناسی Histology تجربی Experimental <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">سابقه وهدف: </span></span></strong><span style="font-size:10.0pt;">سلولهای بنیادی ژله&shy; وارتون می</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">&shy;</span></span><span style="font-size:10.0pt;">توانند گزینه مناسبی برای تمایز و ترمیم آسیب</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">&shy;</span></span><span style="font-size:10.0pt;">های بافت عصبی باشند. کشت سه بعدی با فراهم آوردن محیطی شبیه بدن نسبت به کشت دو بعدی مزیت دارد. هدف از این مطالعه تمایز عصبی این سلولها در محیط کشت سه بعدی پایه کیتوزان است.</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span><br> <strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش&shy; ها:</span></span></strong><span style="font-size:10.0pt;"> این مطالعه تجربی در ۴ گروه (کشت دو بعدی در حضور محیط تمایزعصبی و عدم حضور آن و کشت سه &shy;بعدی در حضور محیط تمایز عصبی و عدم حضورآن) بر روی سلولهای بنیادی ژله وارتون انسانی انجام شد. برای ساخت هیدروژل، هیدروکسی&shy;اتیل&shy; سلولز <span style="color:black;">با نسبت ۴/۸: ۰/۸</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">(HEC: CH- &beta;-GF)</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> به محلول کیتوزان-</span></span><span style="font-size:10.0pt;">بتاگلیسروفسفات<span style="color:black;"> اضافه شد</span>. سلولهای بنیادی ژله &shy;وارتون پس از استخراج به روش آنزیمی از ژله وارتون نوزادان بیمارستان امام خمینی تهران و تایید به روش فلوسیتومتری به تعداد ۱۰^۵</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">&Iacute;</span></span><span style="font-size:10.0pt;">۵ سلول در هر چاهک پلیت۲۴ خانه تحت تاثیر محیط کشت تمایزی در شرایط دو بعدی و سه بعدی به مدت ۴ روز کشت داده شدند. سپس بررسی کمی بیان ژنهای </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">&beta;-Tubulin III</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> و</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Nestin</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> به عنوان دو مارکر و معیار سنجش تمایز عصبی و ژن </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">&beta;-actin</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> (به عنوان کنترل داخلی و ژن معیار یا رفرنس) توسط </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Real time PCR</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> انجام شد.</span><br> <strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته&shy; ها:</span></span></strong><span style="font-size:10.0pt;"> نتایج </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Real time PCR</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> نشان داد، بیان ژنهای </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">&beta;-Tubulin III</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> و</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Nestin</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> در سلولهای بنیادی ژله وارتون در حضور محیط تمایز عصبی در هر دو شرایط کشت سه بعدی (بیش از ۲ برابر) و دو بعدی (بیش از ۴ برابر) نسبت به عدم حضور آن افزایش معنی&shy; دار دارد (۰/۰۰۵</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">p<</span></span><span style="font-size:10.0pt;">). اما بیان این ژنها تحت تاثیر محیط تمایز عصبی در شرایط کشت سه بعدی نسبت به شرایط کشت دو بعدی به طور معنی&shy; داری (بیش از ۱/۵ برابر ) بیشتر بود (۰/۰۱</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">p<</span></span><span style="font-size:10.0pt;">).</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span><br> <strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه&shy; گیری:</span></span></strong><span style="font-size:10.0pt;"> نتایج بدست آمده نشان داد تمایز عصبی در سلولهای بنیادی ژله &shy;وارتون در محیط کشت سه بعدی پایه کیتوزان بیشتر است. </span></span></div> <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>BACKGROUND AND OBJECTIVE:</strong> Wharton Jelly Stem Cells (WJSCs) can be a good option for differentiating and regeneration of nervous system damage. Three dimensional (3D) cell cultures by providing a body-like environment have more advantages than the two dimensional (2D) cell cultures. The aim of this study was to investigate the neural differentiation of these cells in a 3D chitosan based culture environment.<span dir="RTL"></span><br> <strong>METHODS:</strong> This experimental study was performed in 4 groups of 2&3D with and without differentiation media on WJSCs. First, to construct the hydrogel, hydroxyl ethyl cellulose was added to chitosan-beta-glycerophosphate solution (8.4: 0.8) (HEC: CH-&beta;-GF). Human WJSCs after isolation by enzymatic method from wartons&#39; jelly of born infant in&nbsp; Imam Khomeini hospital in Tehran and characterization with flow cytometry, were cultured 5&Iacute;10 ⁵ cell in each well of 24-well plate in a 2D and 3D environment using the hydrogel in neural differentiation media for 4 days. Then, the neural differentiation of WJSCs was evaluated by quantitative analysis of &beta;-Tubulin III, Nestin and &beta;-actin (internal control) genes expression by Real Time PCR (RT-PCR)<span dir="RTL">.</span><br> <strong>FINDINGS:</strong> The results of RT-PCR showed that expression of &beta;-Tubulin III and Nestin genes in WJSCs was significantly increased by the influence of the neural differentiation media in both 2D (more than 4 folds)and 3D (more than 2 folds) culture conditions (p <0.005). But the expression of &beta;-Tubulin III and Nestin in 3D cell culture condition (more than 1.5 folds) was greater than that in the 2D cell culture condition under the influence of the neural differentiation media (p <0.01)<span dir="RTL">.</span><br> <strong>CONCLUSION:</strong> The results showed that neural differentiation of WJSCs in a chitosan based 3D environment is higher than 2D.</span></div> ژله‌وارتون, سلول بنیادی, تمایز عصبی, کیتوزان Wharton's jelly, Stem cells, Neural Differentiation, Chitosan 266 272 http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-2851-1&slc_lang=fa&sid=1 E Mansouri الهه منصوری elias_mansoori@yahoo.com 100319475328460040669 100319475328460040669 No 1. Department of Material Engineerig, Najafabad Branch, Islamic Azad University, Najafabad, I.R.Iran 1- گروه مهندسی مواد، واحد نجف آباد، دانشگاه آزاد اسلامی، نجف آباد، ایران Sh Kermani شبنم کرمانی sh_kermany@yahoo.com 100319475328460040670 100319475328460040670 No 1. Department of Material Engineerig, Najafabad Branch, Islamic Azad University, Najafabad, I.R.Iran 1- گروه مهندسی مواد، واحد نجف آباد، دانشگاه آزاد اسلامی، نجف آباد، ایران A Alizadeh اکرم علیزاده alizadeh.a@semums.ac.ir 100319475328460040671 100319475328460040671 Yes 2. Department of Tissue Engineering and Applied Cell Sciences, School of Medicine, Semnan University of Medical Sciences, Semnan, I.R.Iran 2-گروه مهندسی بافت و علوم سلولی کاربردی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی سمنان، سمنان، ایران