fa ایمنی زائی آنتی ژنهای نوترکیب سیستم ترشحی نوع 3 و زیر واحد اتصالی سم شبه شیگا از باکتری E.coli O157 H7 میکروبیولوژی Microbiology تحقیقی Research <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;">سابقه</span></strong> <strong><span style="color:blue;">و هدف: </span></strong><span style="color:windowtext;">انتروهموراژیک <em>اشرشیاکلی</em> (</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">EHEC</span></span><span style="color:windowtext;">) باعث اسهال و سندرم همولیتیک اورمیک می شود</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">.</span></span><span style="color:windowtext;"> با توجه به خطرات ناشی از درمان آنتی بیوتیکی در عفونت </span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">EHEC</span></span> <span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">O157: H7</span></span><span style="color:windowtext;">، واکسن ها روشی امید بخش برای پیشگیری از عفونت را ارائه می کنند. هدف از این مطالعه بررسی ایمنی زایی پروتئین های نوترکیب </span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">Intimin</span></span><span style="color:windowtext;">،</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">EspA</span></span><span style="color:windowtext;"> و</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">Stx2b</span></span><span style="color:windowtext;"> در برابر عفونت باکتری</span> <em><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">E.coli </span></span></em><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">O157 H7 </span></span><span style="color:windowtext;">می باشد.</span><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"></span></span><br> <strong><span style="color:blue;">مواد و روش&shy;ها:</span></strong> <span style="color:windowtext;">در این مطالعه تحقیقی،</span><span style="color:windowtext;"> بیان </span><span style="color:windowtext;">پروتئین های نوترکیب </span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">Intimin</span></span><span style="color:windowtext;">،</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"> EspA</span></span><span style="color:windowtext;"> و</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">Stx2b</span></span><span style="color:windowtext;"> در</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"> BL21 DE3</span></span> <em><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">E.coli</span></span></em><span style="color:windowtext;"> با</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">IPTG</span></span><span style="color:windowtext;"> القا شد. پروتئین های نوترکیب با وسترن بلات ارزیابی و کروماتوگرافی تمایلی </span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">Ni-NTA</span></span><span style="color:windowtext;"> تخلیص گردید. ایمنی زایی زیرپوستی و درون صفاقی موش ها انجام و تیتر آنتی بادی توسط</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"> ELISA </span></span><span style="color:windowtext;">تعیین شد</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">.</span></span><span style="color:windowtext;"> موشها باخوراندن باکتری آلوده و ریزش باکتری و مرگ و میر موش ها بررسی گردیدند.</span> <span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"></span></span><br> <strong><span style="color:blue;">یافته ها:</span></strong> <span style="color:windowtext;">آنالیز </span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">SDS-PAGE</span></span><span style="color:windowtext;"> بیان پروتئین ها با وزن 11،17 و 35 کیلودالتون را نشان داد. پروتئین های نوترکیب توسط وسترن بلات تایید شد. تیتر پایانی الیزا برای پاسخ هومورال به </span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">EspA</span></span><span style="color:windowtext;">، </span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">Intimin</span></span><span style="color:windowtext;"> و</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">Stx2b </span></span><span style="color:windowtext;">،<a name="OLE_LINK7"></a><a name="OLE_LINK4"> 25600 بود. ریزش باکتری در موش های ایمن تا </a></span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">cfu/ml</span></span><span style="color:windowtext;"> ² 10 و مرگ و میر نیز تا 60 درصد کاهش یافت.</span><br> <strong><span style="color:blue;">نتیجه گیری: </span></strong><span style="color:windowtext;">نتایج نشان داد که پاسخ ایمنی علیه پروتئین های </span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">Intimin </span></span><span style="color:windowtext;">،</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;"> EspA</span></span><span style="color:windowtext;"> و</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">Stx2b</span></span><span style="color:windowtext;"> باعث حفاظت حیوان در چالش با </span><em><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">E.coli </span></span></em><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">O157: H7</span></span> <span style="color:windowtext;">می شود</span><span dir="LTR"><span style="color:windowtext;">.</span></span><strong><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:2 mitra;"></span></span></strong></span></div> <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>BACKGROUND AND OBJECTIVE:</strong> <em>Escherichia coli</em> enterohemorrhagic (EHEC) causes diarrhea, hemolysis colitis, and uremic hemolytic syndrome. Due to the dangers of antibiotic treatment in the EHEC O157: H7 infection, vaccines offer a promising way to prevent infection. The purpose of this study was to investigate the immunity of recombinant proteins Intimin, EspA and Stx2b against infection of <em>E. coli</em> O157 H7.<strong><span dir="RTL"></span></strong><br> <strong>METHODS:</strong> In this research study, expression of recombinant Intimin, EspA and Stx2b proteins <em>E.coli</em> BL21 DE3 was induced with IPTG<span dir="RTL">.</span> Recombinant proteins were examined by Western Blot and purified using the affinity Ni-NTA chromatography. Subcutaneous and intraperitoneally immunization of mice was performed and the antibody titer was determined by ELISA. The mice were orally infected with bacteria and the bacterial loss and mortality of the mice were examined.<br> <strong>FINDINGS: </strong>SDS-PAGE analysis showed expression of proteins with 11,17 and 34 kDa molecular weight. The recombinant proteins were confirmed by Western Blot. ELISA end point titer for humoral response to EspA, Intimin and Stx2b was 25600. The loss of bacteria in mice was 10² cfu / ml and mortality rate were reduced to 60 Percent.<strong><span dir="RTL"></span></strong><br> <strong>CONCLUSION: </strong>The results showed that immune response against EspA, Intimin and Stx2b proteins protects animals against challenges using <em>E. coli</em> O157: H7.<strong><span dir="RTL"></span></strong></span></div> انتروهموراژیک اشرشیاکلی, توکسین شبه شیگا, سیستم ترشحی نوع 3, پروتئین نوترکیب, ایمنی زایی Enterohaemorrhagic Escherichia coli, Shiga like toxin, Type III secretion system, Recombinant protein, Immunization 47 54 http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-2963-3&slc_lang=fa&sid=1 M Theri مجتبی طاهری mojtaba.t.110@gmail.com 100319475328460033889 100319475328460033889 No 1. Faculty and Research Institute of Basic Sciences, Imam Hussein University, Tehran, I.R.Iran 1- دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران Sh Nazarian شهرام نظریان nazarian56@gmail.com 100319475328460033890 100319475328460033890 Yes 2. Biology Research Center, Faculty and Research Institute of Basic Sciences, Imam Hussein University, Tehran, I.R.Iran 2- مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران F Ebrahimi فیروز ابراهیمی febrahim@ihu.ac.ir 100319475328460033891 100319475328460033891 No 2. Biology Research Center, Faculty and Research Institute of Basic Sciences, Imam Hussein University, Tehran, I.R.Iran 2- مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران M bakhshi مصطفی بخشی bakhshi-m@hotmail.com 100319475328460033892 100319475328460033892 No 3. Nanobiotechnology group, Faculty and Research Institute of Basic Sciences, Imam Hussein University, Tehran, I.R.Iran 3- گروه نانوبیوتکنولوژی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران J Fathi جواد فتحی javadfathi70@yahoo.com 100319475328460033893 100319475328460033893 No 1. Faculty and Research Institute of Basic Sciences, Imam Hussein University, Tehran, I.R.Iran 1- دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران