fa ایمنی زائی نانوذرات PLGAواجد پروتئین نوترکیب CfaB از اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک میکروبیولوژی Microbiology تحقیقی Research <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">سابقه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">باکتری <em>اشریشیا کولی</em> انتروتوکسیژنیک، از عوامل شایع اسهال می باشد. &nbsp;با بروز مقاومت آنتی بیوتیکی، ساخت ایمنوژن موثر علیه باکتری ضروری است. فاکتورهای کلونیزاسیون از مهمترین کاندیدای واکسن علیه </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ETEC</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> می باشند. بارگذاری ایمنوژن های نوترکیب از جمله فاکتورهای کلونیزاسیون در نانو حاملها، سبب محافظت آنها در برابر عوامل محیطی شده،</span> <span style="font-size:10.0pt;">غلظتهای مناسب از ایمونوژن را فراهم و فعالیت زیستی را افزایش می دهد. هدف از این تحقیق بررسی ایمنی زائی پروتئین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CfaB</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> بارگذاری شده در نانوذرات </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PLGA</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> می باشد.</span><br> <strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش&shy;ها:</span></span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">در این مطالعه تجربی، بهینه سازی کدونی ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">cfaB</span></span></em><span style="font-size:10.0pt;"> با نرم افزار </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">OPTIMIZER</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> انجام شد. بیان پروتئین در&nbsp; </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">E.coli</span></span></em>&nbsp; <span style="font-size:10.0pt;">با </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">IPTG</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> القا گردید. پروتئین به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص و با وسترن بلاتینگ ارزیابی شد. نانوذرات</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PLGA</span></span> <span style="font-size:10.0pt;">به روش امولسیون دوگانه تهیه و خصوصیات ساختاری با </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">SEM</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">DLS</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> بررسی گردید. ایمن سازی 40 موش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">BALB/C</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> در چهار گروه 10 تایی انجام شد و به گروه اول 20 میکروگرم از پروتئین بارگذاری شده در نانوذره، گروه دوم پروتئین به همراه ادجوانت فروند و گروه سوم و چهارم به ترتیب نانوذرات بدون آنتی ژن و بافر </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PBS</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> تجزیه شد. تزریقات با فاصله دو هفته ای و چهار بار انجام شد و یک هفته پس از تزریقات خونگیری از چشم حیوانات انجام شد و تیتر آنتی بادی با روش الایزا تعیین گردید. ممانعت سرم از اتصال باکتری </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ETEC</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> به سلول </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Caco2</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> بررسی شد.</span><br> <strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته&shy; ها:</span></span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">ژن بهینه سازی شده شاخص سازگاری کدون 0/85 را دارا شد. بیان پروتئین منجر به تولید </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CfaB</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> با وزن 18/9 کیلودالتون شد. میزان پروتئین 5 میلی گرم در لیتر بود. ظرفیت بارگذاری پروتئین در نانوذرات </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PLGA</span></span><span style="font-size:10.0pt;">، 85 درصد بود. متوسط اندازه نانوذرات 170 نانومتر بود. ایمن سازی موشها پاسخ آنتی بادی سرمی را القا کرد. سرم ایمن اتصال </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ETEC</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> به سلول </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Caco2</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> را 62/8% کاهش داد.</span><br> <strong><span dir="RTL"><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه&shy; گیری:</span></span></span></strong><span dir="RTL"><span style="font-size:10.0pt;"> نتایج مطالعه نشان داد که </span></span><span dir="RTL"><span style="font-size:10.0pt;">پروتئین نوترکیب </span></span>&nbsp;<span style="font-size:10.0pt;">CfaB</span><span dir="RTL"><span style="font-size:10.0pt;">بارگذاری شده در نانوذرات </span></span><span style="font-size:10.0pt;">PLGA</span><span dir="RTL"><span style="font-size:10.0pt;"> ایمنی علیه باکتری </span></span><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;ETEC</span><span dir="RTL"><span style="font-size:10.0pt;">را تحریک می کند.</span></span></span></div> <p dir="ltr" style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="font-size:10.0pt;">BACKGROUND</span></strong> <strong><span style="font-size:10.0pt;">AND</span></strong> <strong><span style="font-size:10.0pt;">OBJECTIVE:</span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">Enterotoxigenic <em>Escherichia coli</em> (ETEC) are the most common causes of diarrhea among children. Colonization factors (CFs) are the major ETEC candidate vaccines. Considering the high antibiotics resistance reports, construction of effective immunogen against bacteria is major goal. Encapsulation of recombinant immunogen in nano carriers such as polymeric PLGA nanparticles, not only protects them from degradation in environmental elements but also provides the effective concentrations of immunogen in targets, hence&nbsp; increasing bioactivity. The aim of this study was to investigate the immunogenic properties of CfaB protein encapsulated in PLGA nanoparticles<span dir="RTL">.</span></span><br> <strong><span style="font-size:10.0pt;">METHODS:</span></strong><span style="font-size:10.0pt;"> In this research study, <em>cfaB</em> gene codon optimaztion was performed </span><span style="font-size:10.0pt;">by OPTIMIZER software</span><span style="font-size:10.0pt;">. Expression of recombinant protein in <em>E.coli</em> was induced with IPTG. The recombinant protein was purified using affinity chromatography and evaluated by Western Blotting analysis. PLGA nanoparticles containing recombinant protein were prepared by double emulsion </span><span style="font-size:10.0pt;">method </span><span style="font-size:10.0pt;">and their structures were characterized by SEM and DLS. 40 BALB/C mice in four group were immunized with nanoparticles and antibody titers were determined by ELISA. The efficiency of antibodies in preventing the attachment of ETEC bacteria to the Caco 2 cells was examined.</span><br> <strong><span style="font-size:10.0pt;">FINDINGS:</span></strong><span style="font-size:10.0pt;"> The optimized gene had a Codon adaptation index (CAI) of 0.85. Expression of recombinant protein led to the production of CfaB with molecular weight of 18/9 kDa. Yield of protein was 5mg/L. Encapsulation efficiency of recombinant protein in PLGA nanoparticles was 85<span dir="RTL">٪</span>. The average particle size was 170 nm. Immunization of mice induced serum antibody response. Immunized sera decreased </span><span style="font-size:10.0pt;">%62.8 of </span><span style="font-size:10.0pt;">ETEC adhesion to Caco2 cells.</span><br> <strong><span style="font-size:10.0pt;">CONCLUSION:</span></strong><span style="font-size:10.0pt;"> Recombinant </span><span style="font-size:10.0pt;">CfaB </span><span style="font-size:10.0pt;">protein encapsulated in PLGA nanoparticles stimulate immunity against ETEC.</span></span></p> PLGA, نانوذرات, ETEC, CfaB, ایمنی زائی. PLGA, nanoparticle, ETEC, CfaB, Immunization 39 44 http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-2963-2&slc_lang=fa&sid=1 Sh Nazarian شهرام نظریان nazarian56@gmail.com 100319475328460026501 100319475328460026501 No Biology Research Centre, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, I.R.Iran مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع) L Mousavi Gargari لطیف موسوی گرگری mlatifm@yahoo.com 100319475328460026502 100319475328460026502 Yes Department of Biology, Faculty of Basic Sciences Shahed University, Tehran, I.R.Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه شاهد