fa بررسی مولکولی و آنالیز بیوانفورماتیکی دو جهش شایع ژن فنیل‌آلانین هیدروکسیلاز(PAH) با روش HRM ژنتیک، بیولوژی سلولی و مولکولی Genetics, Cell and Molecular Biology مورد-شاهدی Case-Control <p dir="RTL" style="line-height: 16pt; text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">سابقه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">بیماری فنیل&shy;کتونوری شایع&shy;ترین خطای مادرزادی متابولیسم آمینواسید در جهان است و نرخ بروز آن در ایران در حال افزایش است. هدف از مطالعه حاضر، بررسی کارایی روش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">HRM</span></span> <span style="font-size:10.0pt;">به عنوان روشی سریع و مناسب در شناسایی جهش&shy;های شایع ژن فنیل&shy;آلانین هیدروکسیلاز منجمله </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">IVS10-11G>A</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">P281L</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> می&shy;باشد، تا با کمک به تشخیص زود هنگام این بیماری بتوان از بروز علائم آن جلوگیری کرد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="line-height: 16pt; text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش&shy;ها:</span></span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">در این مطالعه مورد-شاهدی 20 نمونه </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">DNA</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> شامل یک نمونه حاوی جهش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">IVS10-11G>A</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> و یک نمونه حاوی جهش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">P281L</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> و 18 نمونه کنترل فاقد بیماری </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PKU</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> که از خون محیطی استخراج شده و از مرکز ژنتیک پزشکی اصفهان جمع&shy;آوری شدند با روش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">HRM</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> در دستگاه </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Real time PCR</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> تعیین ژنوتیپ گردیدند. جهت تایید جهش ها، نمونه&shy;های جهش یافته با روش توالی&shy;یابی تعیین ژنوتیپ شدند. مطالعه بیوانفورماتیکی برای تعیین اثرات ساختاری و عملکردی جهش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">P281L</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> بر پروتئین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PAH</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> استفاده شد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="line-height: 16pt; text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">یافته&shy; ها:</span></span></strong> <span style="font-size:10.0pt;">روش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">HRM</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> جهش&shy;های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">IVS10-11G>A</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">P281L</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> را با اختصاصیت و حساسیت 100% شناسایی کرد و نمونه&shy;های جهش یافته و کنترل در نمودارهای طبیعی&shy;سازی و تمایز به راحتی از هم قابل تفکیک و تمایز بودند. مطالعات بیوانفورماتیکی اثرات ناپایداری و بیماری&shy;زا بودن پروتئین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PAH</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> حاوی جهش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">P281L</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> را نشان دادند.</span></span></p> <p dir="RTL" style="line-height: 16pt; text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong><span style="color:blue;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه&shy; گیری:</span></span></strong><span style="font-size:10.0pt;"> نتایج مطالعه نشان داد که روش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">HRM</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> روشی ساده و سریع است و با اختصاصیت و حساسیت 100% توانست دو جهش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">IVS10-11G>A</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">P281L</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> را شناسایی کند.&nbsp;</span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><span style="color:#0000FF;"><strong>BACKGROUND</strong> <strong>AND</strong> <strong>OBJECTIVE:</strong></span> Phenylketonuria (PKU) is the most prevalent inborn error of amino acid metabolism in the world and its incidence rate is increasing in Iran. The aim of the present study was to assess the efficiency of HRM technique as a fast and suitable method in identifying common mutations of phenylalanine hydroxylase gene including IVS10-11G>A and P281L in order to improve the early detection of the disease to prevent the occurrence of it.<br> <span style="color:#0000FF;"><strong>METHODS:</strong></span> In this case-control study, 20 DNA samples including one sample with IVS10-11G>A mutation , one sample with P281L mutation and 18 control samples were extracted from peripheral blood collected in Medical Genetic Center of Isfahan and were genotyped with HRM technique. To validate the mutations, the mutant samples were genotyped using sequencing. Bioinformatic analyses were used for determining structural and functional effects of P281L mutation on the of PAH protein.<br> <span style="color:#0000FF;"><strong>FINDINGS:</strong></span> HRM analysis identified IVS10-11G>A and P281L mutations with a sensitivity and specificity of 100% and the mutant and normal samples differentiated well in normalized and difference plots. Bioinformatic analyses demonstrated instability and pathological effects of PAH protein containing P281L mutation.<br> <span style="color:#0000FF;"><strong>CONCLUSION:</strong></span> HRM is a simple and fast technique detecting the two IVS10-11G>A and P281L mutations with 100% sensitivity and specificity.</span><br> &nbsp;</p> فنیل‌کتونوری, حساسیت, اختصاصیت, تعیین ژنوتیپ Phenylketonuria, Sensitivity, Specificity, Genotyping 42 49 http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-2995-1&slc_lang=fa&sid=1 M Amir ملیکا امیر ml_am@yahoo.com 100319475328460026303 100319475328460026303 No Department of Genetics, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord University, shahrekord, I.R.Iran گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، دانشگاه شهرکرد M Emadi-Baygi مجتبی عمادی بایگی emadi-m@sci.sku.ac.ir 100319475328460026304 100319475328460026304 Yes Biotechnology Research Center, Faculty of Science, University of Isfahan, Isfahan I.R.Iran پژوهشکده بیوتکنولوژی، دانشگاه شهرکرد S Vallian صادق ولیان sadeqvallian@gmail.com 100319475328460026305 100319475328460026305 No Department of Genetics and Molecular Biology, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, I.R.Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهان P Nikpour پروانه نیک پور pnikpour@med.mui.ac.ir 100319475328460026306 100319475328460026306 No Department of Genetics and Molecular Biology, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan I.R.Iran گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان F Akhondi فاطمه آخوندی fatemeh.akhoundi68@gmail.com 100319475328460026307 100319475328460026307 No Department of Genetics, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord University, shahrekord, I.R.Iran گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، دانشگاه شهرکرد