Journal of Babol University of Medical Sciences

fa تولید و تخلیص آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه کلرا توکسین Production and Purification of Polyclonal Antibody against Cholera Toxin فیزیولوژی Physiology تحقیقی Research سابقه و هدف: وبا بیماری خطرناکی است که توسط باکتری ویبریو کلرا ایجاد می‌ شود. توکسین کلرا مهم‌ترین عامل ویرولانس در بیماریزایی ویبریوکلرا می باشد. زیر واحد B انتروتوکسین (CTxB) که مسئول اتصال سم به سلول یوکاریوتی است، ویژگیهای ایمونوژنیک دارد. هدف از این تحقیق تولید و تخلیص آنتی بادی علیه پروتئین نوترکیبCTxB می‌باشد.<o:p /> مواد و روشها: پروتئین نوترکیب CTxB بیان و با کروماتوگرافی میل ترکیبیNi-NTA تخلیص گردید. تعداد 10 موش BALB/C با سن پنج هفته به دو گروه کنترل و تست تقسیم شدند. هر موش از گروه تست، 10 میکروگرم از پروتئین نوترکیب را به همراه ادجوان فروند به صورت زیر جلدی دریافت کرد. تیترآنتی بادی در موشهای ایمن شده به روش الایزا بررسی شد.<a name="OLE_LINK2"></a><a name="OLE_LINK1"> سرم موشهای دریافت کننده </a>PBS به عنوان کنترل در روش الایزا استفاده شد. IgG به وسیله ستون تمایلی پروتئین G خالص گردید. اثر مهاری آنتی بادی ضد CTxB بر روی توکسین با استفاده از روش GM1-ELISA ارزیابی شد.<o:p /> یافته‌ها: نتایج الایزا واکنش اختصاصی پروتئین نوترکیب با آنتی بادی ضد توکسین کلرا را نشان داد. میزان پروتئین خالص شده برای هر لیتر از محیط 9 میلی گرم بود. نتایج الایزا نشان داد پس از هر بار تزریق میزان تولید آنتی‌بادی در بدن موش‌ها افزایش یافته است. میزان جذب مربوط به سرم با رقت 500/ 1 بالاتر از 3 بود. غلظت آنتی بادی تخلیص شده بر طبق روش برادفورد، mg/ml 1 بود. در واکنش الایزا، 156 نانوگرم از زیر واحد اتصالی سم توسط آنتی بادی شناسایی شد. اتصال توکسین به GM1 کوت شده با استفاده از سرم حیوان ایمن شده تا 70 درصد کاهش یافت. نتیجه گیری: <a name="OLE_LINK10"></a><a name="OLE_LINK9">نتایج این تحقیق کارائی پروتئین </a>CTxB نوترکیب به عنوان ایمونوژن موثر تحریک کننده پاسخ هومورال علیه توکسین کلرا را نشان داد. آنتی بادی ضد زیر واحد B نوترکیب، توانائی شناسایی توکسین و مهار اتصال آن به گیرنده GM1 را دارا است. BACKGROUND AND OBJECTIVE: Cholera is a debilitating enteric disease, caused by Vibrio cholerae. Cholera toxin is the most important virulence factor in the pathogenesis of Vibrio cholera. Cholera toxin B subunit (CTxB), which forms a bond between the toxin and eukaryotic cells, has immunogenic features. The purpose of this study was to produce and purify antibodies against CTxB recombinant protein.<o:p /> METHODS: The CTxB recombinant protein was expressed and purified by Ni-NTA affinity chromatography. In total, ten 5-week-old BALB/C mice were divided into control and test groups. The test group subcutaneously received 10 micrograms of the recombinant protein along with Freund's adjuvant. Antibody titers were measured by ELISA method. The serum of immunized mice, receiving phosphate-buffered saline, was used in ELISA as the control. Immunoglobulin G was purified by the use of affinity column of G protein. The inhibiting effect of antibody against CTxB on toxin was examined using GM1-ELISA method. <o:p /> FINDINGS: The results of ELISA method showed the binding of recombinant protein to cholera toxin antibody. The amount of purified protein for each liter of the medium was 9 milligrams. ELISA findings showed that after each injection, the amount of antibody in mice was increased. The absorption rate of serum with the dilution of 1:500 was higher than three. According to Bradford assay, the density of purified antibody was 1 mg/ml. In ELISA’S reaction, 156 ng of toxin-binding subunit was identified by the antibody. The binding of toxin to GM1 increased by 70%, using immunized animal serum.<o:p /> CONCLUSION: The results of this study showed the efficiency of CTxB recombinant protein as an effective immunogen for provoking humoral response against cholera toxin. The antibody against the recombinant B subunit was able to identify toxins and inhibit its binding to GM1 receiver ویبریوکلرا, زیر واحد B توکسین کلرا, پروتئین نوترکیب, آنتی بادی پلی کلونال, GM1-ELISA Vibrio Cholera, B Subunit of Cholera, Recombinant Protein, Polyclonal Antibody, GM1-ELISA 7 14 http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-1364-12&slc_lang=fa&sid=1 Shahram Nazarian شهرام نظریان 100319475328460011227 100319475328460011227 No Mohammadali Arefpour محمدعلی عارف‌پور 100319475328460011228 100319475328460011228 Yes Mohammadjavad Bagheripour محمدجواد باقری‌پور 100319475328460011229 100319475328460011229 No gholamreza Olad غلامرضا اولاد 100319475328460011230 100319475328460011230 No