fa کلون سازی و تولید پروتئین نوترکیب مربوط به پایانه کربوکسیل انتهایی آنتی ژن مصونیت زای باسیل سیاه زخم بیوشیمی Biochemical تحلیلی Research سابقه و هدف: تولید آنتی بادی بر علیه آنتی ژن مصونیت زا (PA) می تواند در ایمونوتراپی و درمان بیماری سیاه زخم استفاده گردد. دومن مربوط به بخش کربوکسیل انتهایی PA مهمترین نقش را در تحریک سیستم ایمنی و بیماری زایی آن اعمال می کند. این مطالعه به منظور کلون (همسانه سازی) و تولید نوترکیب ناحیه کربوکسیلی PA این باکتری جهت تولید آنتی بادی انجام شد.<br>مواد و روشها: این مطالعه تجربی بر روی باکتری کشت یافته در شرایط محیط کشت انجام شد. پس از استخراج DNA از باکتری باسیلوس آنتراسیس، وجود ژن PA روی کروموزوم باکتری از طریق PCR تائید گردید. ناحیه مربوط به کربوکسیل انتهایی PA توسط PCR تکثیر و محصول PCR و پلاسمید توسط آنزیم های برش دهنده BamH I و Hind III برش داده شدند. محصول PCR و پلاسمید پس از الحاق به باکتری میزبان (E. coli BL21 (DE3 تراریخت گردید. کلون ها توسط واکنش PCR، هضم آنزیمی و توالی یابی مورد غربالگری و تائید قرار گرفتند. سپس تولید پروتئین نوترکیب مورد نظر به روش الکتروفورز SDS-PAGE و نهایتا وسترن مورد تائید قرار گرفت. <br>یافته ها: توالی بازهای ناحیه کربوکسیلی PA با استفاده از روشهای توالی یابی، PCR و برش آنزیمی، همسانه سازی (کلونینگ) ژن مورد نظر در باکتری را تائید کردند. الکتروفورز SDS-PAGE و وسترن بلات دال بر تولید پروتئین نوترکیب مورد نظر با وزن مولکولی 20 کیلودالتون بود. <br>نتیجه گیری: نتایج مطالعه نشان داد که با روش کلون سازی می توان مقادیر زیادی از این پروتئین نوترکیب باسیل سیاه زخم را تولید نمود که روزنه را برای کاربردهای بعدی به ویژه تولید آنتی بادی و واکسن بر علیه بیماری مورد نظر باز می نماید. BACKGROUND AND OBJECTIVE: Antibody production against to protective antigen (PA) can be helpful in immunotherapy and anthrax treatment. The carboxyl terminal part of PA has the most important playing in immune system induction. The objective of this study is cloning and recombinant expression of carboxyl site of protective protein for antibody production.<br>METHODS: In this experimental study after DNA extraction from Bacillus anthracis, the presence of PA gene on bacterial chromosome was confirmed by PCR method. The site of carboxyl terminal from PA protein amplified by PCR method, then PCR productions and plasmid were cut out by BamH I and Hind III restriction enzymes. PCR production and plasmid transformed into E. coli BL21 (DE3). Clones containing gene of interest was determined by PCR reaction, enzyme digestion and sequencing. Moreover, the production of recombinant proteins was confirmed by SDS-PAGE and western methods.<br>FINDINGS: The sequence of carboxyl terminal part of PA was confirmed by sequencing, PCR and enzymatic digestion method which suggestion to intended gene cloning in E. coli BL21 (DE3). SDS-PAGE and western blotting confirmed the production of recombinant protein with 20 KD in molecular weight.<br>CONCLUSION: According to the results of this study, this recombinant protein can be produced in high levels by this method, which opens a new window for vaccine and monoclonal antibody production against the intended disease. باسیل سیاه زخم، پروتئین PA، کلون سازی، سیاه زخم Bacillus anthracis, PA protein, Cloning, Anthrax 7 14 http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-3-756&slc_lang=fa&sid=1 Keyhan AH, Tahmasbpour Marzony E, Farhadi N, Kamali M امیرهمایون کیهان، عیسی طهماسب پور مرزونی، نیما فرهادی، مهدی کمالی 1003194753284600756 1003194753284600756 No