fa استخراج و تخلیص فریتین از بافت کبد بیوشیمی Biochemical تحلیلی Research سابقه و هدف: مولکول فریتین با وزن مولکولی 450 کیلودالتون، پروتئین اصلی ذخیره کننده آهن می باشد که از 24 زیرواحد شامل زنجیره های سبک و سنگین تشکیل شده است و هر مولکول آن می تواند 4500 اتم آهن فریک را در خود ذخیره نماید. هدف این مطالعه، تعیین تخلیص فریتین با درجه خلوص بالا جهت استفاده در سیستم های تشخیصی و تحقیقاتی می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه با استفاده از حرارت دادن بافت هموژنیزه شده کبد در دمای 75 درجه سانتیگراد، رسوب دادن با سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با سفادکس G-200، فریتین از این بافت استخراج و تخلیص گردید. بمنظور افزایش درجه خلوص فریتین کروماتوگرافی چرخشی مورد استفاده قرار گرفت. پروتئین حاصل، در ژل پلی آکریلامید در مجاورت سدیم دودسیل سولفات الکتروفورز گردید (SDS-PAGE). از آزمون الایزا و رنگ آمیزی ژل با پتاسیم فری سیانید برای اطمینان از حصول فریتین و از رنگ آمیزی ژل با نیترات نقره جهت اطمینان از درجه خلوص فریتین استفاده شد. جهت تایید وجود زیرواحدهای 19 و 21 کیلودالتون، فریتین حاصله در شرایط احیا در حضور 2-مرکاپتو اتانول الکتروفورز شد. یافته ها: در این روش فریتین کاملا خالص بدست آمد و بازده این روش 100 میکروگرم فریتین به ازای هر گرم بافت تازه کبد بود. الکتروفورز فریتین در شرایط احیا در حضور 2-مرکاپتو اتانول، وجود زیرواحدهای 19 و 21 کیلودالتون را در این پروتئین تایید نمود. نتیجه گیری: روش مورد استفاده جهت استخراج و تخلیص فریتین از بافت کبد منجر به تولید فریتین با درجه خلوص بسیار بالا گردید که برای استفاده در زمینه های تشخیصی و تحقیقاتی مناسب بوده و بازده این روش نسبت به مطالعات دیگر قابل قبول می باشد. Background and Objective: Ferritin with molecular weight of 450 kDa is the most important iron storage protein and is made of 24 subunits consisting of light and heavy chains. Each Ferritin molecule is able to store 4500 Fe3+ molecules. The aim of this study was to determine the preparation of highly pure Ferritin for usage in diagnostic and research systems. Methods: In this study, Ferritin was extracted and purified by homogenizing liver tissue, heating at 75 degrees centigrade, ammonium sulfate fractionation and gel filtration chromatography on sephadex G-200 column. The purity of Ferritin was improved by using recycling chromatography. Resulted protein was electrophoresed on polyacrylamide gel in the presence of sodium dodecylsulfate (SDS-PAGE). Existence of Ferritin was confirmed by ELISA test and potassium ferricyanide staining of gel. Silver nitrate staining of gel was used to confirm the purity of Ferritin. Electrophoresis of Ferritin under reducing conditions in presence of 2-mercapto ethanol was done to show the subunits (19 and 21 kDa) of ferritin. Findings: This purification method resulted in very pure Ferritin and the yield was 100 µg/gr of wet liver tissue. Electrophoresis of Ferritin under reducing conditions in presence of 2-mercapto ethanol showed the both subunits (19 and 21 kDa) of Ferritin. Conclusion: Highly pure Ferritin resulted by this method in appropriate for diagnostic and research purpose and the yield is reasonable comparing other studies. فریتین, تخلیص, کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون, کروماتوگرافی چرخشی Ferritin, Purification, Gel filtration chromatography, Recycling chromatography 14 21 http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-1370-288&slc_lang=fa&sid=1 R Behjati Ardakani رضا بهجتی اردکانی، 10031947532846002408 10031947532846002408 Yes MR Sadeghi محمدرضا صادقی، 10031947532846002409 10031947532846002409 No R Ghods رویا قدس، 10031947532846002410 10031947532846002410 No AH Bayat علی احمد بیات، 10031947532846002411 10031947532846002411 No M Jeddi Tehrani محمد جدی تهرانی 10031947532846002412 10031947532846002412 No