مطالعه بیان ژن ureI هلیکوباکترپیلوری به روش RT-PCR
|
مهسا فاضلی ، عباس دوستی* |
مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی ، abbasdoosti@yahoo.com |
|
چکیده: (4613 مشاهده) |
سابقه و هدف: هلیکوباکترپیلوری یک ارگانیسم مارپیچی شکل و گرم منفی بوده که عامل زخم معده است و نقش مهمی در ایجاد سرطان معده دارد. اجزای مختلف اوره آز، از عوامل مهم برای تحریک سیستم ایمنی هستند. هنوز واکسن موثری علیه این باکتری وجود ندارد و تحقیقات در زمینه یافتن واکسن، ضروری به نظر می رسد. هدف از تحقیق حاضر، ایجاد سازواره ژنی بر اساس ژن ureI و بررسی بیان آن است.
مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، تکثیر ژن ureI با انجام PCR روی ژنوم سویه استاندارد هلیکوباکترپیلوری تهیه شده از موسسه پاستور، صورت پذیرفت. قطعه 612 جفت بازی مربوط به ureI به روش T/A cloning در پلاسمید pTZ کلون گردید، سپس ساب کلونینگ این ژن در پلاسمید PIRES2-EGFP انجام شد. سازواره PIRES2-EGFP-ureI به روش الکتروپوریشن به سلول های جانوری CHO منتقل و بیان یوکاریوتی ژن ureI با تکنیک RT-PCR بررسی گردید.
یافته ها: کلونینگ قطعه 612 جفت بازی ژن ureI در دو ناقل pTZ و PIRES2-EGFP با استفاده از تکنیک های PCR، هضم آنزیمی توسط SacI و EcoRI و تعیین توالی تایید گردید. پس از انجام RT-PCR روی سلول های CHO ترانسفرم شده، باند مربوط به ژن ureI تشکیل شد.
نتیجه گیری: وکتور نوترکیب PIRES2-EGFP-ureI، قدرت بیان ژن ureI را دارد. بیان موفق این ژن در سلول های جانوری، می تواند در جهت بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی به عنوان یک واکسن نوترکیب مد نظر قرار گیرد.
|
|
واژههای کلیدی: هلیکوباکترپیلوری، کلون سازی، ureI، الکتروپوریشن، بیان ژن |
|
متن کامل [PDF 267 kb]
(1575 دریافت)
|
نوع مطالعه: تحقیقی |
موضوع مقاله:
ژنتیک، بیولوژی سلولی و مولکولی دریافت: 1395/8/5 | پذیرش: 1396/2/10 | انتشار: 1396/4/14
|
|
|
|
|
ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|